抗铜绿假单胞菌IgY的制备优化及抑菌效果

• 作者: 姚刚 姚羽菲 文荟淋 龙敏
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 鸡卵黄抗体 抑菌效应
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 202-205,208
• 页数: 5页
• 分类号: Q816
• 字数: 4405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2018.02.018

摘要

目的 探讨高效价、高纯度且生物活性好的抗铜绿假单胞菌(PA)的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备工艺.方法 采用超声破碎、共振裂解、研磨破碎等方法裂解PA,筛选出最佳裂解抗原,然后将裂解抗原或经甲醛灭活的全菌抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的Ig Y抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法(SDS-PAGE)和二喹啉甲酸(BCA)法测定抗体纯度和浓度,平板法评价IgY对PA的抑菌效果,并以蒸馏水作为对照;扫描电镜法检测细菌形态变化.结果 超声破碎法裂解的PA抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5 mL的1×109 CFU/m L灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可高达1:25600;硫酸铵沉淀,超滤纯化后的抗体纯度可达94％,浓度为27.02 mg/mL;IgY体外抑菌试验表明,2.7 mg的抗体能明显抑制PA生长,与蒸馏水对照组相比,IgY试验组菌落数减少了9/10,并且明显抑制了细菌绿色色素的产生;扫描电镜观察Ig Y试验组菌体较长、较大且皱缩.结论 采用灭活全菌免疫母鸡,经水稀释、硫酸铵沉淀、超滤纯化的制备方法可得到高纯度和高效价的抗PA IgY,所制抗体具有特异性和显著抑菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龙敏	四川大学生命科学学院	8	29	3.0	5.0
2	姚羽菲	四川大学华西临床医学院	1	0	0.0	0.0
3	文荟淋	四川大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	姚刚		1	0	0.0	0.0