抗铜绿假单胞菌PcrV的scFv-Fc抗体的制备及体外活性研究

• 作者: 徐见容 朱建伟 翟贯星 路慧丽 陆璐 陈代杰 高斐
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 铜绿假单胞菌 PcrV 单克隆抗体 生物膜 黏附 侵入
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 微生物药物筛选
• 页码范围: 26-32
• 页数: 7页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 制备靶向铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)Ⅲ型分泌系统组件蛋白PcrV的scFv-Fc形式的单克隆抗体MFa,并研究其体外对铜绿假单胞菌生物膜形成及细胞黏附和侵入的影响.方法 将编码MFa的DNA序列合成后,插入到真核表达载体中,获得重组质粒,再采用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒转染HEK293E细胞并获得瞬时表达;表达的产物通过HiTrapMabSelect SuRe柱进行纯化,所得到的抗体采用SDS-PAGE分析纯度,采用BCA法测定蛋白浓度.为了检测MFa抗体与PcrV抗原的亲和力,对PcrV抗原进行表达纯化,方法是将PcrV目的序列插入到pET28a表达载体中,转化E.coli BL21(DE3)获得宿主菌,在0.5mmol/L IPTG 15℃的条件下诱导过夜,并通过His-Tag标签进行亲和纯化.对于纯化的MFa抗体与PcrV抗原通过Western blot、ELISA、SPR(表面等离子共振)研究抗体与抗原的亲和力,并研究抗体体外对生物膜形成的影响,对铜绿假单胞菌黏附与侵入HeLa细胞的影响.结果MFa抗体在H-EK293瞬转系统成功获得表达与纯化,且对PcrV蛋白具有较好的亲和活性,KD值为492.2nmoi/L.功能实验证实,MFa抗体能够降低铜绿假单胞菌生物膜的形成,降低铜绿假单胞菌对HeLa细胞黏附与侵入作用.结论 靶向PcrV的scFv-Fc抗体MFa具有对铜绿假单胞菌引起的感染的潜在效用,具有进一步开发为抗铜绿假单胞菌治疗药物的价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈代杰	上海交通大学药学院	43	35	3.0	4.0
2	朱建伟	上海交通大学药学院	25	24	2.0	4.0
3	翟贯星	上海师范大学生命科学学院	4	3	1.0	1.0
4	陆璐	华东理工大学生物工程学院	5	45	2.0	5.0
5	路慧丽	上海交通大学药学院	16	39	3.0	6.0
6	高斐	上海交通大学药学院	1	0	0.0	0.0
7	徐见容	4上海交通大学基础医学院	1	0	0.0	0.0