玉米根尖组织原生质体的分离和流式分析

• 作者: 冯娇娇 孔瑶 宋志伟 张政权 李思璐 郭东伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 玉米 根尖 原生质体 酶解法 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 2160-2167
• 页数: 8页
• 分类号: S-3|S513
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.12.017

摘要

为探究基因表达对根尖细胞命运决定的影响,需将根部不同类型细胞分群,以进行更深入的分析.本研究通过酶解法获取玉米(Zea mays)幼嫩根尖组织的原生质体,利用荧光染色和流式细胞术进行分析和分选.实验结果显示,对于4～5 d的幼嫩玉米根尖组织,酶解获取原生质体的最优方案为:酶处理组合为1.0％纤维素酶和0.3％果胶酶,最适渗透压条件为10％甘露醇,最适酶解时间为4h,最适pH值为5.8.对于上述最佳条件下提取的原生质体进行纯化,原生质体悬浮液中的细胞碎片等杂质得到有效清除.以荧光染料碘化丙啶(propidium iodide,PI)和荧光素双醋酸酯(fluorescein diacetate,FDA)对纯化的原生质体进行染色,荧光显微镜下观察显示,原生质体活性较高;为了进一步进行流式分选,对于不同荧光染料进行染色效果分析显示,Hoechst33342对活性原生质体的染色效果优于4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI),可使体系中大部分原生质体染色,且分辨率高;同时,Hoechst33342最佳染色温度为38℃,最佳染色pH值为11.59.本研究为深入探讨植物根尖细胞的相关研究提供了实验依据.