慢病毒介导转染Adra1 d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

• 作者: 侯晓敏 秦小江 赵良渊
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Adra1d基因 血管平滑肌细胞 RNA干扰 钙离子 钙调蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 1306-1310,1316
• 页数: 6页
• 分类号: R331|R363
• 字数: 3224字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2018.07.025

摘要

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca2+浓度及钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体.用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-qPCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca2+浓度变化,RT-qPCR和Western blot法检测VSMCs CaM的mRNA和蛋白表达.结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011 TU/L.转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调.慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85％;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca2+荧光强度显著升高,而且CaM的mRNA和蛋白表达量也显著增加.结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca2+浓度和CaM表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵良渊	山西医科大学体育教学部	18	50	4.0	5.0
2	侯晓敏	山西医科大学基础医学院	19	53	4.0	6.0
3	秦小江	山西医科大学公共卫生学院	24	70	5.0	7.0