地塞米松降解新基因的探讨

• 作者: 张进 斯丹 李津阳 杨致邦 熊玉霞 蒋仁举 马廉举
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 伯克霍尔德菌 地塞米松 降解 基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 15-24
• 页数: 10页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180102

摘要

目的:探讨地塞米松降解代谢新基因,为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路.方法:根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001 (B.CQ001)全基因纽测序和生物信息学分析,筛选疑似与地塞米松代谢相关的基因.提取B.CQ001总RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板,利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)验证筛选出的新基因,测序鉴定后连接原核表达载体pET-28a-c(+),构建重组质粒pET-28a-Ivd.将pET-28a-Ivd转化感受态B.CQ001,高效液相色谱(HPLC)验证表达菌降解能力的提升.结果:从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因,分别为ORF05499、ORF05827、ORF06535,其表达产物分别为过氧化物还原酶、甾酮异构酶、异戊酰辅酶A脱氢酶;RT-qPCR分析显示,3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调,基因ORF06535表达上调明显;在B.CQ001中过表达基因ORF06535,HPLC检测显示,表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0％和80.0％,相比原菌B.CQ001有明显提升.结论:在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535,并完成基因克隆和功能验证,为制备地塞米松及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨致邦	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	119	522	12.0	17.0
2	马廉举	重庆医科大学药学实验教学中心	15	97	5.0	9.0
3	蒋仁举	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	11	44	5.0	6.0
4	熊玉霞	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	5	6	1.0	2.0
5	张进	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	12	28	4.0	4.0
6	斯丹	重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室	3	5	1.0	2.0
7	李津阳	重庆医科大学临床医学专业一系	1	0	0.0	0.0