高迁移率蛋白-1在大鼠腰椎软骨终板退变中的作用及相关机制

• 作者: 吉德民 李峰 李磊 杨学军 祝勇 胡宝阳 辛大齐 邢文华
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率蛋白-1 ERK信号转导途径 软骨终板 大鼠
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1026-1033
• 页数: 8页
• 分类号: R681.5|R363
• 字数: 5820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2018.11.10

摘要

目的:观察高迁移率蛋白-1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)在大鼠腰椎软骨终板退变中的作用,探讨其相关机制.方法:选取4周龄SD大鼠处死,在显微镜下取出腰椎软骨终板,消化后提取细胞,再进行培养、分离、纯化,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原鉴定软骨终板细胞(cartilage endplate cell,CEC).用不同浓度的FBS分别培养CEC 24h、48h,MTT法检测细胞活性.在第三代CEC中加入HMGB1后,分别在3h、6h、12h、24h时检测金属基质蛋白酶-3(proteins of the matrix metalloproteinase,MMP-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的mRNA表达,6h、12h、24h时检测蛋白表达量;CEC中加入100ng/ml HMGB1后分别在0、5、10、30、60和120min,使用Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化的表达;继而将CEC分为6组:对照组、HMGB1 (100ng/ml)组、FPSMZ1 (HMGB1抑制剂)组、HMGB1 +FPSMZ1组、U0126(ERK抑制剂)组、HMGB1+U0126组),使用Western blot分别检测MMP-3、VEGF和ERK信号转导途径磷酸化的表达及Elisa检测IL-10的表达.全部结果均为重复独立3次实验,计算其均数±标准差.结果:分离纯化的细胞Ⅱ型胶原抗体表达呈阳性,为CEC细胞;10％FBS培养48h为CEC增殖最佳的时间点和浓度;HMGB1能够诱导ERK和JNK信号转导途径磷酸化,从开始到10min逐渐升高,10min时达峰值.HMGB1上调了MMP-3 (P=0.039)和VEGF的mRNA (P=0.042)表达,下调IL-10 (P=0.025)的mRNA表达,三种因子蛋白表达与mRNA有相同的规律;HMGB1 +FPSZM1组与HMGB1组相比,ERK信号转导途径的磷酸化明显减少;在CEC中加入U0126后,MMP-3 (P=0.041)和VEGF(P=0.042)蛋白表达明显降低,而IL-10(P=0.004)蛋白表达明显增高;在CEC中加入FPSMZ1后,HMGB1对ERK信号转导途径磷酸化表达的作用明显降低(P=0.031).结论:HMGB1可增加大鼠腰椎CEC中的MMP-3和VEGF的表达,降低IL-10的表达,其可能是通过ERK信号转导途径实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢文华	内蒙古医科大学第二附属医院骨科	41	120	7.0	9.0
2	祝勇	内蒙古医科大学第二附属医院骨科	19	47	4.0	6.0
3	李峰	内蒙古医科大学第二附属医院骨科	14	39	3.0	6.0
4	李磊	内蒙古医科大学第二附属医院骨科	10	17	1.0	4.0
5	胡宝阳	内蒙古医科大学研究生学院	2	0	0.0	0.0
6	吉德民	内蒙古医科大学研究生学院	1	0	0.0	0.0
7	辛大齐	内蒙古医科大学第二附属医院骨科	1	0	0.0	0.0