泛素特异性蛋白酶18刺激乙型肝炎病毒复制的初步研究

• 作者: 叶海艳 姚敏 廖鑫忠 李世林 李玉佳 赵航 陈利民
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素特异性蛋白酶18(USP18) 乙型肝炎病毒 病毒复制 蛋白免疫印迹试验 实时荧光定量PCR 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 361-365
• 页数: 5页
• 分类号: Q556.+9|R373.2+1|R446.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2018.04.009

摘要

目的 了解泛素特异性蛋白酶18(USP18)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响及其潜在机制.方法 1)USP18和Pol质粒构建:采用常规基因克隆方法,将人USP18编码序列及HBV多聚酶(Pol)编码序列分别构建到pcDNA3.1-3tag真核细胞表达载体内.2)研究Pol对USP18的影响:高表达转染Pol质粒至HepAD38细胞内,抽提细胞内总RNA,逆转录成cDNA,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Pol对USP18的影响.3)研究USP18对HBV的影响:高表达转染USP18质粒至HepAD38细胞内,抽提细胞内总RNA和总DNA,qRT-PCR检测USP18对HBV复制的影响.4)研究Pol与USP18之间的相互作用:将Pol质粒按一定比例转染到铺有293T细胞的10cm培养皿中,采用免疫共沉淀的方法检测Pol与USP18之间是否存在相互作用.结果 成功构建USP18和Pol表达质粒,并在HepAD38细胞中高表达;过表达Pol蛋白促进USP18表达;过表达USP18刺激HBV复制;Pol与USP18存在相互作用.结论 初步证明USP18可能通过与Pol相互作用促进HBV复制.