ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨

• 作者: 刘凤娟 刘园园 曹海军 李长清 杜晞 林方昭
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ThT结合试验法 β-淀粉样多肽 孵育温度 96孔板 缓冲液 复溶方式
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 356-361
• 页数: 6页
• 分类号: R392-33|R446|Q7
• 语种: 中文
• DOI: 10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2018.04.008

摘要

目的 探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽l～42(Aβ42)聚集情况的条件.方法 Aβ42经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度.分析Aβ42不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42聚集情况的影响.结果 在ThT结合试验法中,Aβ42孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以最终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1％ NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以最终2％ v/v (DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观.结论 不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜晞	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	5	14	3.0	3.0
2	曹海军	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	17	62	4.0	7.0
3	林方昭	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	24	116	5.0	10.0
4	李长清	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	52	149	6.0	8.0
5	刘凤娟	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	5	8	2.0	2.0
6	刘园园	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	5	7	2.0	2.0