基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体

• 作者: 刘冰南 刘婷婷 宋吉雪 李妍 李成 李琳 王亮 王际辉 耿旭辉 肖珊
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 寡聚体 硫磺素T 时间相关单光子计数 荧光寿命
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 有机化学
• 页码范围: 90-95
• 页数: 6页
• 分类号: O629.73
• 字数: 4730字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7503/cjcu20180397

摘要

采用时间分辨荧光技术,检测了不同形态蛋白聚集体的荧光染料硫磺素T(ThT)荧光寿命.利用蛋清溶菌酶体外制备了蛋白聚集体;采用透射电子显微镜(TEM)及ThT稳态荧光检测了结合蛋白纤维生长的动力学曲线,确定其形成寡聚体及纤维样聚集体的特征和时间.通过时间相关单光子计数(TCSPC)技术测定了蛋清溶菌酶单体、寡聚体和淀粉样纤维的ThT荧光寿命曲线,并拟合、计算其荧光寿命.根据圆二色谱(CD)分析结果推测聚集体的结构不同导致其与ThT的结合状态不同,从而影响ThT荧光寿命.结果表明,通过测定ThT荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体和纤维样聚集体,并监测蛋白寡聚体的形成,为后续病理蛋白聚集过程中形成寡聚体物质的监测提供了研究基础.