维生素D受体Fok Ⅰ多态性对牙周组织细胞CYP24A1表达的影响

• 作者: 侯建霞 刘凯宁 孟焕新
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 维生素D受体 维生素D受体Fok I多态性 维生素D24羟化酶
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: R781.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2018.01.003

摘要

目的:维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)基因的第二外显子存在唯一一个可以影响VDR蛋白结构的多态性位点,其可以由限制性核酸内切酶Fok I所识别,分为FF、Ff和ff三型.CYP24A1是维生素D 24羟化酶的编码基因,是常见的维生素D效应基因.本研究将探讨人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,hGF)和牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)中VDR-Fok I多态性对CYP24A1表达的影响.方法:原代培养 12名供体的hGF和hPDLC,提取基因组DNA,PCR扩增包含多态性位点的267 bp的片段.根据Fok I对片段酶切的结果判断VDR-Fok I基因型.确定基因型后,给各基因型hGF和hPDLC以10 nmol/L lα,25双羟维生素D3(1,25OH2D3)或 1 000 nmol/L 25 羟维生素 D3(25OHD3)刺激48 h,提取RNA,其中 10 nmol/L 1,25OH2D3 刺激48 h后还提取蛋白.之后给予hGF和hPDLC VDR拮抗剂ZK159222,再以10 nmol/L 1,25OH2D3或1 000 nmol/L 25OHD3刺激48 h,提取RNA.应用Real-time PCR和Western blot的方法检测维生素D24羟化酶CYP24A1和VDR的mRNA和蛋白的表达水平.结果:12名供体中,FF、ff和Ff型分别为4例、3例和5例.1,25OH2D3刺激hGF和 hPDLC后,FF型细胞CYP24A1的mRNA表达水平显著高于Ff型或ff型细胞(hGF:F=31. 147,P <0. 01 ;hPDLC: F=23.347,P<0.01);FF型细胞CYP24A1的蛋白表达水平同样显著高于Ff型或ff型细胞(hGF:F=12. 368,P< 0.01;hPDLC:F=15.749<0.01).250HD3 刺激 hGF 和 hPDLC 后,FF 型细胞 CYP24A1 的 mRNA 表达水平也显著高于 Ff 型或 ff 型细胞(hGF: F=32. 061,P < 0. 01 ;hPDLC: F=32. 569,P < 0. 01).如 1,25OH2D3刺激伴有 ZK159222,则三型细胞CYP24A1的mRNA表达水平差异无统计学意义(hGF:F=0. 246,P=0. 787;hPDLC:F=0.574,P=0.583).如250HD3刺激伴有ZK159222,则三型细胞CYP24A1的mRNA表达水平差异也无统计学意义 (hGF:F=1. 636,P=0. 248;hPDLC: F=0. 582,P=0. 578).不同刺激条件下,hGF 和 hPDLC 两种细胞比较 CYP24A1或VDR的表达水平,差异均无统计学意义.结论:在hGF和hPDLC中,FF型VDR可介导比其他基因型 VDR更为显著的CYP24A1上调,提示FF型VDR可能具有更强的转录活性.