人源性CD3抗体诱导食蟹猴T淋巴细胞培养方法的建立

• 作者: 孟小琴 宋倩 缪怡 董坚 角德灵 赵恒 高嫦娥
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 同源性 抗人CD3抗体 T淋巴细胞 食蟹猴 诱导培养
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 407-413
• 页数: 7页
• 分类号: R73-35
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385x.2018.04.015

摘要

目的:在初步分析人、食蟹猴和猪CD3蛋白同源性的基础上,建立利用人源性CD3抗体诱导食蟹猴外周血T淋巴细胞的体外分离培养技术.方法:从NCBI查询获取人类、食蟹猴和猪CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN软件进行序列比对、同源性分析和构建系统进化树.Western blotting检测三种T细胞膜上CD3蛋白的表达水平.分离健康食蟹猴PBMC,分为3组,A组加入抗人CD3抗体单刺激、B组加入IL-2单刺激、C组加入抗人CD3抗体和IL-2共刺激.倒置显微镜下观察细胞生长状态并计数,绘制细胞生长曲线,锥虫蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测T细胞表面标志物CD3、CD4、CD8的表达.结果:食蟹猴、猪的CD3蛋白氨基酸序列与人类的同源性分别为86.9％、65.6％,T细胞膜上CD3蛋白的表达量分别为人的79％、17％.A组细胞不增殖;C组细胞增殖能力、细胞活性及CD3表达率[(93.8±3.6)％vs (70.3±4.7)％,P＜0.01]均显著高于B组,细胞生长曲线呈S形,符合Logistic生长曲线;C组T细胞高表达CD3,T细胞纯度较高,且CD8+T细胞占比较多.结论:食蟹猴外周血T淋巴细胞膜表面能表达和人同源性很高的CD3蛋白,在人源性CD3抗体、IL-2和1％PHA共刺激下能诱导食蟹猴外周血T淋巴细胞的增殖分化,获得生长状态良好、增殖能力强、纯度较高的T淋巴细胞.