色素上皮衍生因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的保护作用

• 作者: 常鲁 李艳 王慧凤 许丽 韩新红
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 色素上皮衍生因子 血管内皮生长因子 基因转染 视网膜缺血-再灌注损伤
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 324-328
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1
• 字数: 4949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2018.0076

摘要

目的 观察色素上皮衍生因子色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(pigment epithelial-derived factor gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells,PEDF-MSCs)对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型中PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及对视网膜神经节细胞的保护作用.方法 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的慢病毒(lentivirus,LV)为载体,将PEDF基因以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1、10、20、50体外转染至人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)中,应用RT-PCR及ELISA法分别检测以最佳MOI值转染细胞中PEDF的表达情况.选取健康SD雄性大鼠,采用高眼压的方法制成RIRI模型,随机分为正常对照组(N组)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)治疗组(PBS组)、hUCMSCs治疗组(M组)及PEDF基因转染的hUCMSLs治疗组(P组);N组不予特殊处理,其余三组大鼠造模成功后立即进行干预治疗,PBS组给予PBS治疗,P组与M组分别给予PEDF-MSCs、hUCMSCs治疗.5d后处死大鼠,尼氏染色计数视网膜神经节细胞数目,计算视网膜内层厚度,RT-PCR检测大鼠视网膜PEDF和VEGF的mRNA表达情况.结果 荧光显微镜下观察到转染率高达75.8％.RT-PCR结果显示,转染后PEDF-MSCs的上清液中PEDF mRNA相对表达量(4.34±0.29)明显高于hUCMSCs(1.08±0.15),差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示,转染后PEDF-MSCs上清液中PEDF蛋白表达量[(83.09±7.58)μg·L-1]明显高于hUCMSCs[(12.30±1.24) μg·L-1],差异有统计学意义(P＜0.05).尼氏染色结果显示造模后PBS组大鼠神经节细胞数量变少,治疗5d后,P组、M组大鼠神经节细胞数量均高于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);P组高于M组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗5d后,P组、M组大鼠视网膜厚度均厚于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);P组厚于M组.RT-PCR检测结果显示,P组PEDF mRNA表达水平显著升高,VEGF mRNA表达水平下降,与PBS组、M组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 玻璃体内注射PEDF-MSCs能上调RIRI模型大鼠视网膜PEDF表达,并下调VEGF表达,对RIRI大鼠视网膜神经节细胞有保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳	潍坊医学院附属医院眼科	26	62	4.0	7.0
2	韩新红		3	3	1.0	1.0
3	许丽		3	9	2.0	3.0
4	常鲁		4	12	2.0	3.0
5	王慧凤		1	2	1.0	1.0