短发卡RNA介导的缺氧诱导因子-1α基因沉默对缺氧状态下骨肉瘤细胞增殖的影响

• 作者: 孙军 李阳
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 骨肉瘤 缺氧诱导因子-1α 基因沉默 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 895-898
• 页数: 4页
• 字数: 4241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2018.05.030

摘要

目的 观察缺氧环境对原代骨肉瘤细胞增殖的影响,以及用短发卡RNA (shRNA)沉默缺氧诱导因子(HIF)-1α基因后,缺氧状态下原代骨肉瘤细胞增殖的变化.方法 将原代骨肉瘤细胞分别置于缺氧环境(37℃、1％ O2、5％ CO2)或常氧环境(37℃、21％O2、5％ CO2)下培养,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western blot检测HIF-1 α蛋白表达水平.其次,将HIF-1α基因及阴性对照基因(SCR)对应的shRNA由慢病毒载体介导转染原代骨肉瘤细胞,分别记为HIF-1 α/shRNA组和SCR/shRNA组,定量聚合酶链反应(qPCR)定量分析HIF-1αmRNA变化,Western blot检测转染后细胞HIF-1 α蛋白表达变化.最后,转染后的细胞再次缺氧培养,采用MTT法检测细胞增殖.结果 细胞实验显示,缺氧环境可在一定时间(24 h)内抑制原代骨肉瘤细胞增殖,但随着缺氧时间延长抑制作用减弱,与常氧组比较,缺氧细胞12 h细胞增殖率减少30.5％,24 h减少25.0％.同时HIF-1α表达升高,表明肿瘤细胞增殖与HIF-1α之间明显相关.转染shRNA后,与空白对照组及SCR/shRNA组比较,HIF-1 α/shRNA组的HIF-1α mRNA相对表达量明显降低(P =0.000),HIF-1α蛋白表达下降(P=0.000),缺氧培养的细胞增殖受到抑制.结论 shRNA介导的HIF-1 α基因沉默可以有效逆转缺氧环境中HIF-1 α对骨肉瘤细胞增殖的促进作用,从而可能干预肿瘤发育和生长的进程.