miRNA-204靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡

• 作者: 尚庆文 陶蕾
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微小RNA-204 细胞凋亡 Bcl-2 糖尿病 胰岛素
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 427-432
• 页数: 6页
• 分类号: R966
• 字数: 3998字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2018.06.001

摘要

目的 探讨过表达微小RNA-204(miR-204)靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡的作用机制.方法 小鼠胰岛瘤细胞MIN6用含β-巯基乙醇的DMEM高糖培养基培养,采用脂质体Lipofectamine 2000转染miR-204化学合成过表达物和(或)Bcl-2过表达质粒,制备成miR-204(+)组和miR-204(+)+Bcl-2(+)组.转染48 h后,MTT法检测细胞存活;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;ELISA法测定胰岛素分泌;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-204含量及Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3表达水平.结果 MTT结果显示,miR-204(+)组细胞存活率显著低于正常对照组(P<0.01),而miR-204(+)+Bcl-2(+)组相较于miR-204(+)组细胞存活率显著升高(P<0.05);Hoechst33258染色结果显示,miR-204(+)组出现大量细胞凋亡,miR-204(+)+Bcl-2(+)组细胞凋亡率有所下降;胰岛素分泌结果显示,高糖(葡萄糖30 mmol·L-1)刺激下的miR-204(+)组细胞胰岛素分泌显著低于高糖刺激下的正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01);qPCR结果显示,miR-204(+)组miR-204水平显著高于正常对照组(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达水平显著低于正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01),各组Bax和胱天蛋白酶3 mRNA水平无显著变化;Western蛋白质印迹检测结果显示,miR-204(+)组Bcl-2蛋白表达水平显著低于miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.05)和正常对照组(P<0.01),而Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平显著高于其他两组(P<0.01).结论 过表达miR-204可能通过靶向Bcl-2促进胰岛β细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶蕾		1	1	1.0	1.0
2	尚庆文		2	2	1.0	1.0