基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取       
摘要:
目的 探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型.方法 查阅RB1突变数据库(http://rb1-lsdb.d-lohmann.de),确定视母细胞瘤发生发展相关Rb1基因外显子区主要有8号外显子;利用DNAman检测人类与食蟹猴基因组中Rb1基因中与是否存在单核苷酸多态性(SNP);通过http://crispr.cos.uni-heidelberg.de/index.html设计并合成sgRNA;采用CRISPR/Cas9基因编辑系统转染食蟹猴成纤维细胞,并提取转染后细胞基因组以检测合成的sgRNA敲除效率;酶切实验检测转染的细胞是否发生突变,并利用单克隆分析测定具体敲除效率.进一步利用显微操作技术注射sgRNA和Cas9 nuclease混合物(RNP)入单细胞胚胎,检测胚胎水平Rb1基因编辑效率.结果 RNP转染后的食蟹猴成纤维细胞提取基因组检测,发现其中有75%的细胞发生基因突变,且基因编辑类型多样,以碱基缺失突变为主;在胚胎水平上获取4-细胞期胚胎,检测单个卵裂球基因组序列发现,存在突变的胚胎占所有胚胎的36.4%,其中纯合突变比例为18.2%,嵌合突变比例同为18.2%.利用软件预测脱靶位点12个,进行序列测定,结果未发现脱靶.结论 在非人灵长类细胞及胚胎水平上,CRISPR/Cas9基因编辑系统对于食蟹猴Rb1基因编辑有效,并且敲除效率较高,进一步利用基因编辑方法建立视网膜母细胞瘤模型研究中,可以作为有效的基因编辑手段.本研究得到的食蟹猴胚胎Rb1基因的编辑效率及胚胎囊胚率为建立视网膜母细胞瘤模型提供了参考.
推荐文章
基于优化sgRNA系统提高海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑功效的 研究
棉花
CRISPR/Cas9
编辑效率
脱靶效率
sgRNA类型
棉花CRISPR/Cas9基因编辑有效sgRNA高效筛选体系的研究
棉花
瞬时转化
CRISPR/Cas9
基因组编辑
CRISPR/Cas9编辑花生FAD2基因研究
花生
油酸
亚油酸
FAD2
基因组编辑
CRISPR/Cas9系统及其在作物育种中的应用
作物育种
基因编辑
CRISPR/Cas9系统
定点修饰
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数  
(/次)
(/年)
文献信息
篇名 CRISPR/Cas9基因编辑系统应用于非人灵长类细胞及胚胎Rb1基因编辑的研究
来源期刊 解放军医学院学报 学科 医学
关键词 视网膜母细胞瘤 聚簇规则间隔短回文重复序列/相关核酸酶9 基因敲除 打靶效率 脱靶效率
年,卷(期) 2018,(8) 所属期刊栏目 基础研究论著
研究方向 页码范围 707-712
页数 6页 分类号 R739.72
字数 4822字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.2095-5227.2018.08.016
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 李建雄 解放军总医院放射治疗科 25 73 6.0 7.0
2 吴璇 解放军总医院放射治疗科 10 78 5.0 8.0
3 赵志飞 解放军总医院放射治疗科 7 15 2.0 3.0
4 怀思远 解放军总医院放射治疗科 2 0 0.0 0.0
5 褚楚 1 0 0.0 0.0
6 曹静 1 0 0.0 0.0
7 冀天楠 解放军总医院放射治疗科 3 1 1.0 1.0
传播情况
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献  (45)
共引文献  (29)
参考文献  (19)
节点文献
引证文献  (0)
同被引文献  (0)
二级引证文献  (0)
1990(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1997(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2001(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2002(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2004(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
2008(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2009(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2010(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2011(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
2012(3)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(3)
2013(7)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(7)
2014(9)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(8)
2015(14)
  • 参考文献(4)
  • 二级参考文献(10)
2016(11)
  • 参考文献(7)
  • 二级参考文献(4)
2017(8)
  • 参考文献(6)
  • 二级参考文献(2)
2018(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2018(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
视网膜母细胞瘤
聚簇规则间隔短回文重复序列/相关核酸酶9
基因敲除
打靶效率
脱靶效率
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
解放军医学院学报
月刊
2095-5227
10-1117/R
大16开
北京复兴路28号解放军总医院学报编辑部
82-881
1980
chi
出版文献量(篇)
7301
总下载数(次)
20
总被引数(次)
28238
  • 期刊分类
  • 期刊(年)
  • 期刊(期)
  • 期刊推荐
论文1v1指导