猪伪狂犬病病毒PCR-LFD检测方法的建立及应用

• 作者: 任卫科 张莉 李秀丽 池晶晶 王利丽 田向学 路超 郑丽 鄢明华 韩伟
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病病毒 聚合酶链反应 横向流动试纸条
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 35-40
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5297字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.11.007

摘要

旨在将PCR技术与可视化的横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立猪伪狂犬病病毒野毒株的PCR-LFD快速检测技术.依据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计2条特异性引物和对应的特异性探针,其中下游引物和探针分别标记了荧光素(FITC)和生物素(Biotin).通过对PCR退火温度、引物浓度、探针杂交温度的筛选,确定PCR-LFD方法的最佳反应条件,并对其敏感性、特异性和重复性进行检测.结果显示,所建立的检测方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株,与猪伪狂犬病病毒Bartha-K61株、6种对照病毒和3种对照细菌均无交叉反应,其最低检测限为100TCID50/100μL.该方法对同批次和不同批次猪伪狂犬病病毒D N A分别进行5次重复检测,结果完全一致.该方法对50份临床样品进行检测,PCR-LFD方法和病毒分离培养法检测出16份阳性样品,常规PCR检测出14份阳性样品,PCR-LFD方法的敏感性高于PCR,但两者间差异不显著P>0.05.以上结果表明,所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且不需要琼脂糖凝胶电泳可直接判读结果,适合养殖场、基层实验室的现场检测.