白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤

• 作者: 伍小松 张晓春 方娟 杨青 陈指龙 黎陈
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 白藜芦醇 氧化损伤 沉默调节蛋白1 解偶联蛋白2 小鼠睾丸间质细胞TM3
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 2632-2640
• 页数: 9页
• 分类号: S823|R285.5
• 字数: 6341字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2018.07.023

摘要

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制.首先,用不同浓度(0、150、200、250、300 μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0 μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h.在整个培养过程中采用iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量.结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8h后,极显著降低细胞存活率(P＜0.01),因此确定150 μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度.2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P＞0.05);用2.5、5.0和10.0μmoL/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P＜0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P＞0.05).因此,选用5.0 μmol/L为RES的安全浓度.3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P＜0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P＜0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P＜0.01或P＜0.05).由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM3细胞的氧化损伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	伍小松	湖南农业大学动物科学技术学院	59	138	6.0	9.0
2	杨青	湖南农业大学动物医学院	26	78	6.0	8.0
3	方娟	湖南农业大学动物医学院	5	4	1.0	1.0
4	张晓春	湖南农业大学动物医学院	3	9	2.0	3.0
5	陈指龙	湖南农业大学动物医学院	6	10	2.0	3.0
6	黎陈	湖南农业大学动物医学院	6	3	1.0	1.0