牦牛Cyclin D1基因的克隆及IGF-Ⅰ对其在睾丸支持细胞表达的影响

• 作者: 何翃闳 余四九 叶小琳 崔燕 李谷月 樊江峰 潘阳阳 王亚营 王萌
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 睾丸支持细胞 细胞周期蛋白D1 胰岛素样生长因子-Ⅰ
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 310-317
• 页数: 8页
• 分类号: S823.8+5.2
• 字数: 5137字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.02.010

摘要

本研究旨在克隆牦牛(Bos grunniens)CyclinD1基因的CDS序列,分析其生物学特性,研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对Cyclin D1 mRNA和蛋白在睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)中表达的影响.采集5～8月龄健康牦牛的睾丸样品进行SC的分离培养,用RT-PCR技术克隆牦牛Cyclin D1基因,用ORFFinder、MEGA7.0和DNAMAN对其进行生物信息学分析,并采用免疫荧光染色技术对Cyclin D1蛋白在SC中的表达进行定位分析.向体外培养的SC中加入不同浓度(0(对照组)、25、50、100、150 ng· mL-1)的IGF-Ⅰ,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测Cyclin D1基因和蛋白的表达.结果表明:1)牦牛Cyclin D1基因(GenBank登录号:KY 420723)与其他物种的同源性均较高.2)Cyclin D1蛋白在SC胞核中高表达,为核蛋白.3)浓度为25和150 ng· mL-1IGF-Ⅰ,Cyclin D1 mRNA表达量与对照组差异不显著(P＞0.05),浓度为50和100 ng· mL-1IGF-Ⅰ时,Cyclin D1 mRNA表达量显著高于其他各组(P＜0.05);IGF-Ⅰ浓度为100 ng·mL-1,Cyclin D1蛋白表达量与对照组差异不显著(P＞0.05),25、50和150 ng·mL-1 IGF-Ⅰ组Cyclin D1蛋白表达量显著高于对照组(P＜0.05);IGF-Ⅰ浓度为50 ng·mL-1时,Cyclin D1 mRNA和蛋白表达量均为最高,分别为对照组的1.65和1.20倍.综上表明,Cyclin D1基因在进化过程中高度保守;IGF-Ⅰ可调控SC中Cyclin D1的表达,其最佳作用浓度为50 ng·mL-1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余四九	甘肃农业大学动物医学院	165	736	11.0	19.0
2	樊江峰	甘肃农业大学动物医学院	32	116	7.0	9.0
3	崔燕	甘肃农业大学动物医学院	119	412	10.0	13.0
4	李谷月	甘肃农业大学动物医学院	7	27	3.0	5.0
5	潘阳阳	甘肃农业大学动物医学院	40	69	5.0	7.0
6	王萌	甘肃农业大学动物医学院	13	13	2.0	3.0
7	何翃闳	甘肃农业大学动物医学院	11	18	2.0	4.0
8	王亚营	甘肃农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
9	叶小琳	甘肃农业大学动物医学院	1	2	1.0	1.0