家蚕抗BmNPV细胞因子的筛选和分析

• 作者: 化晓婷 夏庆友 李显扬 王菲
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 家蚕 家蚕核型多角体病毒 BmRelish 细胞因子 抗病毒免疫
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 789-799
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2018.04.018

摘要

[目的]探讨家蚕NF-κB类转录因子BmRelish在抗核型多角体病毒(Bombyxmori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)感染的免疫应答中的作用,筛选和分析抗病毒细胞因子,完善对家蚕抗病毒免疫机制的认识.[方法]通过Western blot检测当BmNPV感染家蚕BmE细胞后BmRelish全长形式(BmRelish-FL)是否转变成其活性形式(BmRelishact);利用荧光定量PCR检测过表达BmRelishact的细胞在感染BmNPV后胞内病毒DNA的相对水平,观测在被荧光标记的BmNPV (BmNPV-EGFP)感染后呈现EGFP荧光的细胞数,并与作为对照的未表达BmRelishact的细胞相比较,以确定BmRelish是否参与抗病毒免疫;将新鲜细胞通过Transwell细胞共培养体系经过表达BmRelisha.的细胞上清培养液孵育后,定量检测在感染BmNPV后胞内病毒DNA的相对水平,以探讨过表达BmRelishact的细胞是否产生并分泌抗病毒细胞因子;通过超滤等方法对过表达BmRelishact的细胞上清培养液予以初步分离,将滤过液和截留液分别孵育新鲜细胞,定量检测感染BmNPV后胞内病毒DNA的相对水平,从而确定抗病毒细胞因子的分子量范围;用高温处理滤过液和截留液后再孵育新鲜细胞,定量检测感染BmNPV后胞内病毒DNA的相对水平以确定抗病毒细胞因子的属性;利用LC-MS/MS对滤过液中的多肽做进一步鉴定和分析.[结果]BmE细胞被BmNPV感染后,部分BmRelish-FL转变成其活性形式BmRelishact;过表达BmRelishsct的细胞被BmNPV感染后,胞内病毒DNA的相对水平显著低于对照细胞,且呈现EGFP荧光的细胞数也较对照少;新鲜细胞经过表达BmRelishact的细胞上清培养液孵育后,胞内病毒DNA的相对水平显著低于用对照细胞上清培养液孵育的细胞;用1 00和3 kD超滤管超滤过表达BmRelishact的细胞上清培养液后,滤过液仍然具有显著降低所孵育细胞的胞内病毒DNA的相对水平,而截留液无此活性;经高温处理后,该细胞上清培养液不再具有降低所孵育细胞的胞内病毒DNA相对水平的作用;在滤过液中通过质谱鉴定到67个肽段,长度为9-45个氨基酸,富集到32个蛋白质,分子量均＞3 kD,其中9个蛋白质含有信号肽.[结论]BmNPV感染导致BmRelish的激活;活化的BmRelish促进细胞产生抗病毒细胞因子并分泌到上清培养液中;该细胞因子具有增强细胞抗病毒能力的活性,为分子量＜3 kD的多肽.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏庆友	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	103	602	14.0	20.0
2	王菲	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	34	183	10.0	12.0
3	化晓婷	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	2	4	2.0	2.0
4	李显扬	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	1	2	1.0	1.0