日本鳗鲡TLR3基因的克隆及其免疫功能分析

• 作者: 余丽丽 冯建军 张子平 林鹏 王婷婷 王艺磊 郭松林
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 日本鳗鲡 TLR3 基因克隆 荧光定量 肝脏细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 160-171
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0656

摘要

Toll样受体3(TLR3)是用于识别双链RNA的一种重要模式识别受体.利用RT-PCR和RACE技术克隆了日本鳗鲡TLR3(AjTLR3)基因cDNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测分析该基因在日本鳗鲡各组织器官以及体外肝脏细胞的表达水平变化,以期对日本鳗鲡TLR3基因的序列特征及其功能进行研究.结果表明:AjTLR3基因全长3383 bp,开放阅读框为2766 bp,编码921个氨基酸.该蛋白具有16个LRR的胞外结构域、跨膜结构域以及TIR结构域,其中在TIR结构域含有一个高度保守的氨基酸残基Tyr778.AjTLR3基因在日本鳗鲡各组织器官中均有表达,其中肝脏表达量最高;经poly I:C刺激后在血、肠、肝脏、脾脏、皮肤、心脏及肌肉组织中均显著提高;而LPS刺激后,仅在肝脏和肠中有显著提高.日本鳗鲡肝脏细胞体外实验结果显示:poly I:C处理后12 h和24 h表达水平显著增高,CpG-DNA和肽聚糖处理后24 h表达量均有显著增加;而细菌浓度达到107 CFU/mL和108 CFU/mL后,AjTLR3基因表达水平分别在24 h、12 h显著增高并达到峰值.以上研究表明,AjTLR3在日本鳗鲡抵御病毒及细菌的免疫应答过程中具有重要作用.