欧洲鳗鲡MyD88基因的克隆及其免疫功能分析

• 作者: 冯建军 姚志刚 张在鹏 张子平 林鹏 王艺磊 郭松林
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 欧洲鳗鲡 髓样分化因子 基因克隆 荧光定量 免疫功能
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 305-317
• 分类号: Q785|S965
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20140909481

摘要

髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是TLR(toll-like receptor)信号通路的关键接头蛋白,在先天性免疫中发挥重要作用.实验首次克隆了欧洲鳗鲡MyD88基因cDNA全长序列,命名为AaMyD88,其全长为1 539 bp,开放阅读框为846 bp,编码282个氨基酸.该蛋白三维丝带空间结构图与人类的MyD88十分相似,具有MyD88家族典型的死亡结构域和TIR(toll-like/IL-1 receptor)结构域,其中TIR结构域中含有3个序列高度保守的box1、box2和box3.同源性分析显示,欧洲鳗鲡MyD88氨基酸序列与斑点叉尾(鮰)相似性最高,为76.3％,与其他鱼类相似性为67.5％ ～ 73.2％,与哺乳动物相似性较低,为61.6％～62.6％.欧洲鳗鲡MyD88在系统进化树中与其他鱼类MyD88聚为一支,哺乳类以及两栖类MyD88分别聚为一支.实时荧光定量PCR检测发现,AaMyD88基因在欧洲鳗鲡各组织器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,心脏、肠、脾脏以及肾脏中也有较高的表达,而肌肉和鳃中的表达水平较低;欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后,肾脏AaMyD88基因在第7天表达量有显著性提高,14 d后恢复至正常水平,而脾脏AaMyD88基因表达水平从第7～21天持续显著上调,于第7天达到峰值,其表达量为肾脏的1.7倍;欧洲鳗鲡鳍细胞系经poly I∶C处理后,AaMyD88基因表达水平在3h显著降低,6～48 h均有显著升高,于12h达到峰值.LPS处理后的欧洲鳗鲡鳍细胞系AaMyD88基因表达水平在3h显著降低,6和12h显著升高,于12h达到峰值,24 h后恢复至正常水平.poly I∶C处理组MyD88基因表达水平在12 ～48 h均显著高于LPS处理组.研究表明,MyD88在欧洲鳗鲡抵御外源微生物的免疫应答反应中发挥重要作用.