猪MyD88基因的原核表达

• 作者: 崔青 房永祥 景志忠 曾爽 陈国华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪MyD88分子 原核表达 大肠埃希菌
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1-5
• 分类号: Q786
• 字数: 4117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2010.12.001

摘要

采用PCR方法从pGEM-pMyD88重组质粒中克隆了猪MyD88分子全长基因,构建了无信号肽序列的原核表达载体pET-30a-pMyD88-ED,在不同IPTG浓度和时间下进行诱导表达,利用切胶洗脱法纯化表达的融合蛋白.结果表明,在IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为6 h时表达量达到最大,SDS-PAGE分析表明表达出约35 ku的融合蛋白,主要以包涵体的形式存在;通过切胶纯化后,融合蛋白的纯度可达90%;Western blot分析显示,表达的融合蛋白能被抗His标签的单克隆抗体识别,说明目的蛋白在大肠埃希菌中得到了成功表达.