巴贝西虫实时荧光PCR检测方法初步建立及牡丹江市无偿献血者中巴贝西虫流行情况调查

• 作者: 何苗 刘鱼 吴文杰 李洪军 杨亚闪 谭宝华 郭艳丽 黄杨
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巴贝西虫 实时荧光PCR IFA 无偿献血者
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 271-276
• 页数: 6页
• 分类号: R457.1|R382.3|R446
• 语种: 中文
• DOI: 10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2018.03.015

摘要

目的 建立一种筛查多种可感染人巴贝西虫(包括Babesia.microti,B.divergens,B.venatorum,Babesia.sp EU1,Babesia_sp._XXB/ Hangzhou等)的实时荧光PCR检测方法;用实时荧光PCR和间接免疫荧光检测(IFA)2种方法分别对牡丹江市无偿献血者血样进行核酸和血清学检测,评估其对当地输血安全的风险.方法 从GenBank下载我国可感染人巴贝西虫的18S rRNA基因序列,并根据序列共同部分设计引物,用引物验标准质粒并优化实验条件,建立实时荧光PCR检测方法.将1 971份无偿献血者的血液标本离心,使其分离成红细胞和血浆2个部分:1971份红细胞标本混样(10份/pool),用已建立的实时荧光PCR进行核酸检测,阳性混样池再拆分检测;其中1 000份血浆标本用IFA法进行B.microti IgG检测.结果 经琼脂糖凝胶电泳和一代测序验证,标准质粒构建成功且实验条件已经优化,成功建立了实时荧光PCR检测方法,重复性良好,最低检测下限为9.69×102 copies/mL;1 971份红细胞样本巴贝西虫核酸检测结果均为阴性;1000份血浆样本B.microti IgG血清学检测结果显示共13例阳性(阳性率1.3％),其中8例(0.8％)滴度为1∶64,5例(0.5％)滴度为1∶128.结论 本研究成功建立了一种筛查多种感染人巴贝西虫的实时荧光PCR核酸检测方法;标本检测结果显示牡丹江地区有既往B.microti感染,提示巴贝西虫已经对该地区血液安全造成一定威胁,但风险大小有待进一步评估.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘鱼		21	117	7.0	9.0
2	杨亚闪	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	3	5	1.0	2.0
6	郭艳丽	牡丹江市中心血站	2	4	1.0	2.0
7	李洪军	牡丹江市中心血站	2	1	1.0	1.0
8	黄杨	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	4	6	2.0	2.0
12	吴文杰	牡丹江市中心血站	1	1	1.0	1.0
13	谭宝华	牡丹江市中心血站	1	1	1.0	1.0
14	何苗	中国医学科学院北京协和医学院输血研究所	18	47	4.0	5.0