靶向Bak1的shRNA表达腺病毒构建及其对人骨肉瘤细胞的影响

• 作者: 万雷 柴爽 王吉利 黄宏兴 黄红
• 来源期刊: 江西医药
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 Bcl-2拮抗1 基因沉默 人骨肉瘤细胞 细胞活性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 310-314
• 页数: 5页
• 分类号: R738
• 字数: 3892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2238.2018.4.009

摘要

目的 构建沉默人Bcl-2拮抗1基因(Bak1)的重组腺病毒,感染人成骨肉瘤细胞MG63并检测其对细胞活性的影响.方法 设计特异性针对Bak1的shRNA序列及无关对照序列scr,分别构建重组腺病毒表达载体,感染人成骨肉瘤细胞MG63,利用qPCR和Western blot检测Bak1基因沉默后的MG63细胞Bak1 mRNA及蛋白的表达,筛选出能高效沉默目标基因的重组腺病毒表达载体,并对其进行包装扩繁,荧光显微镜观察计算病毒滴度,利用MTT法检测高效沉默的重组腺病毒感染MG63细胞后的细胞活性.结果 ①测序列结果表明,shRNA序列已成功克隆入到pAd-GFP载体上;②shRNA-3的沉默效率最高,扩增纯化后腺病毒滴度达到7.7×108GFU/ml;③MTT检测显示与NC对照组相比,shRNA-3组MG63细胞活性增强(P<0.5).结论 成功构建了沉默Bak1的重组腺病毒,为进一步研究Bak1的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宏兴		101	788	16.0	22.0
2	黄红	广州中医药大学护理学院	43	333	10.0	16.0
3	万雷		63	287	10.0	14.0
4	柴爽		17	71	5.0	8.0
5	王吉利	广州中医药大学护理学院	15	62	5.0	7.0