KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响

• 作者: 万军 刘剑芳 叶晶 叶迪 姜慧敏 徐瑶 王梦龙 王震 赵生娣
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: KATP通道 E23K突变 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R542.2
• 字数: 3299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2018.02.008

摘要

目的 研究ATP 敏感性钾通道Kir6. 2 亚基E23K 突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响.方法 (1) 在心肌组织中提取总RNA, RT-PCR 法获取cDNA, 合成特异性引物, 用PCR 法获得kir6. 2、SUR2A 的ORF 片段, 用T4DNA 连接酶将上述片段与线性化的pEGFP-C1 连接, 重组的pEGFP-C1 /kir6. 2 用PCR 法进行E23K 定点突变, 获得真核表达质粒pEGFP C1 / kir6. 2, pEGFP C1 /kir6. 2 (E23K) 及pEGFP C1 /SUR2A.(2) 重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2 细胞, 使其在H9C2 细胞中表达.(3) 生理盐水与1mg /L 阿霉素(Adriamycin, ADR) 分别处理转染后细胞, 分为4 组: A 组为野生型重组质粒+ 生理盐水处理组(WT + NS); B 组为含E23K 突变重组质粒+ 生理盐水处理组(E23K + NS); C 组为野生型重组质粒+ 阿霉素损伤组(WT + ADR); D 组为含E23K 突变重组质粒+ 阿霉素损伤组(E23K + ADR).(4) 采用TUNEL 法检测心肌细胞凋亡指数(AI).(5) Western blot 法测定caspase-3、Bcl-2、Bax 蛋白表达.AlphaEase FC 软件取值读取各样品条带灰度值.结果 (1) TUNEL结果示, 应用ADR 后凋亡比例升高, 与WT + ADR 组相比, E23K + ADR 组凋亡比例更高(P ＜ 0. 05).(2) 阿霉素处理后, 所有组促凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax) 表达均增高, 抗凋亡蛋白(Bcl-2) 表达降低, 且E23K + ADR 组caspase-3 与Bax 蛋白表达均大于WT + ADR 组, Bcl-2 蛋白表达低于WT + ADR 组(P ＜ 0. 05).结论 KATP通道kir6. 2 亚基E23K 突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡.