RNA干扰沉默DDX1基因的胶质瘤细胞系的建立

• 作者: 周筠 崔红霞 连海伟
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DDX1基因 RNA干扰 慢病毒 胶质瘤
• 年，卷（期）: 2018,（23）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2711-2714
• 页数: 4页
• 分类号: R97
• 字数: 3092字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.23.09

摘要

目的 以短发夹核糖核酸( RNA)慢病毒载体建立DEAD-box 解旋酶1 (DDX1)基因稳定沉默的胶质母细胞瘤细胞株.方法 针对DDX1基因设计2组短发夹RNA序列,退火形成的双链DNA与线性 pLKO.1-puro-eGFP质粒载体连接,构建慢病毒质粒载体,测序正确后进行慢病毒包装;将获得的重组慢病毒转染人胶质瘤U251细胞,转染细胞分为对照组和干扰组,对照组转染对照慢病毒(shNC);干扰组转染慢病毒载体pLKO.1-puro-eGFP-shRNA-DDX1 (shDDX1-1,shDDX1-2).用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,进行嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量聚合酶链式反应(PCR)、蛋白免疫印迹法检测转染后U251细胞中DDX1 mRNA及蛋白表达.结果 测序证实成功构建对照组和靶向DDX1 基因的 RNA 干扰( RNAi)慢病毒载体,病毒悬液滴度均 ＞3 ×108 TU· mL-1.荧光显微镜下观察显示,对照组和干扰组转染效率高于85%;嘌呤霉素筛选后,干扰组shDDX1-1、shDDX1-2中DDX1 mRNA的抑制率分别为85.44%和71.66%,DDX1蛋白表达水平分别下降了99.1%和96.7%,均较对照组(100%)显著降低(均P＜0.01).结论 成功构建沉默DDX 1基因的胶质瘤细胞系,为研究DDX1对胶质瘤生物学行为的影响提供细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔红霞	齐齐哈尔医学院药学院	74	303	9.0	14.0
2	连海伟	武汉大学人民医院神经外科	10	44	3.0	6.0
3	周筠	武汉大学人民医院神经外科	7	15	2.0	3.0