靶向HER2/EGFR分子双特异性单链抗体的构建及其体内外抗乳腺癌的研究

• 作者: 张长庆 郭艳
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 人类表皮生长因子受体2 表皮生长因子受体 乳腺癌 双特异性单链抗体
• 年，卷（期）: 2018,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2887-2891
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9
• 字数: 4643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2018.19.013

摘要

目的 构建一种可以同时靶向抑制人类表皮生长因子受体2(HER2)和表皮生长因子受体(EG-FR)分子的双特异性单链抗体,从而降低单一通路抑制而造成的耐药性,增强抗肿瘤效果.方法 采用Overlap PCR法通过柔性肽(G4S)将曲妥珠单抗的可变区与西妥昔单抗连接,构建工程载体,并通过大肠埃希菌系统进行表达纯化,获得同时靶向HER2和EGFR的双特异性单链抗体;流式细胞术检测双特异性单链抗体对EGFR和HER2过表达的乳腺癌细胞BT474的结合能力;噻唑蓝(MTT)法检测单链抗体对BT474乳腺癌细胞的增殖抑制;建立BT474荷瘤小鼠动物模型,检测双特异性单链抗体的体内抗肿瘤活性;使用免疫组织化学检测单链抗体是否可以抑制表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化,并对肿瘤细胞增殖指标Ki-67进行检测.结果 通过基因工程手段和毕赤酵母表达及镍柱纯化,成功获得双特异性单链抗体,经蛋白印迹法鉴定验证了双特异性单链抗体表达及装配正确.流式细胞术检测双特异性单链抗体与乳腺癌细胞B T 474的结合率为53.3％,与曲妥珠单抗(69.0％)、西妥昔单抗结合率(60.3％)相当.MTT法中,与磷酸盐缓冲液(PBS)组相比,曲妥珠单抗组、西妥昔单抗组与双特异性单链抗体组对乳腺癌细胞BT 474均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.在蛋白水平为400 nmol/L时,双特异性单链抗体组抑制率[(65.19±4.21)％]强于曲妥珠单抗组[(40.67±1.78)％]与西妥昔单抗组[(32.20±2.94)％].通过裸鼠移植瘤模型的体内抗肿瘤实验,双特异性单链抗体组在体内仍能发挥较强的抗肿瘤效果,高剂量组肿瘤抑制率可以达到(74.32±4.37)％,明显优于曲妥珠单抗组(44.83±6.02)％ 与西妥昔单抗组(39.44±8.75)％.通过免疫组织化学对给药后的肿瘤组织进行分析,与PBS组相比,双特异性单链抗组可以明显抑制BT474皮下移植瘤组织中p-EGFR、Ki-67的表达量.结论 采用毕赤酵母表达体系成功构建并表达了双特异性单链抗体.双特异性单链抗体具有良好的体内外抗肿瘤活性,有效抑制乳腺癌细胞BT474的体内外增殖,并通过免疫组织化学分析到双特异性单链抗体可以抑制EGFR的磷酸化并抑制肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张长庆	内蒙古医科大学附属人民医院乳腺肿瘤科	6	3	1.0	1.0
2	郭艳	内蒙古医科大学附属人民医院乳腺肿瘤科	15	54	4.0	6.0