抗EGFR/VEGF双特异性单链抗体的构建及其抗卵巢癌SKOV-3的研究

• 作者: 毛小刚 江红
• 来源期刊: 中国妇幼健康研究
• 关键词: 表皮生长因子受体 人类表皮生长因子 卵巢癌 双特异性单链抗体
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 1357-1361
• 页数: 5页
• 分类号: R711.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.014

摘要

目的 将表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)同时进行靶向治疗,可协同抑制作用,增强抗肿瘤效果.方法 使用重叠聚合酶链式反应(PCR)手段,西妥昔单抗的可变区和贝伐珠单抗的可变区通过G4S柔性肽连接在一起,获得同时靶向EGFR和VEGF的双特异性单链抗体(scDb);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测scDb与EGFR和VEGF的结合活性,并计算亲和力常数;流式细胞术检测scDb对受体过表达的卵巢癌细胞系SKOV-3的结合能力;MTT法检测scDb对卵巢癌细胞系SKOV-3的增殖抑制;Western Blot研究与单独给药相比 scDb对 SKOV-3相关信号通路的影响;建立卵巢癌SKOV-3细胞荷瘤小鼠动物模型,检测scDb的体内抗肿瘤活性.结果 通过重叠PCR手段和毕赤酵母X-33表达,成功获得scDb,经Western blot鉴定验证了scDb的分子量为55kD,证明表达及装配正确.ELISA检测scDb与EGFR和VEGF均有结合活性,通过EC50计算,得到scDb与EGFR的亲和力常数为1.27nM,与VEGF的亲和力常数为0.75nM.流式细胞术检测scDb与SKOV-3的结合率为72.00%.MTT实验,亲本抗体组与双特异性单链抗体组对SKOV-3均有抑制作用.通过Western blot实验表明,scDb能同时阻断EGFR和激酶结构域受体(KDR)的磷酸化,最终导致丝氨酸/苏氨酸激酶等信号通路被强烈抑制.通过SKOV-3细胞裸鼠移植瘤模型的体内抗肿瘤实验,scDb组在体内仍能发挥较强的抗肿瘤效果,高剂量组肿瘤抑制率可以达到(74.53±9.63)%.结论 该文成功构建并表达了scDb.scDb具有良好的体内外抗肿瘤活性,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛小刚	湖北文理学院附属襄阳市中心医院妇产科	3	23	3.0	3.0
2	江红	湖北文理学院附属襄阳市中心医院妇产科	6	59	5.0	6.0