以包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体的复性、纯化和活性研究

• 作者: 付天云 冯捷 刘英 叶雪 崔恒 钱和年 黄华梁
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 卵巢肿瘤/遗传学 抗体,抗独特型/代谢 包涵体/代谢 肿瘤蛋白质类/分离和提纯
• 年，卷（期）: 1998,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 400-403
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.1998.05.006

摘要

目的:探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体(6B11scFv)的复性、纯化及其活性.方法:重组质粒pL-6B11scFv转化大肠杆菌pop2136,温度诱导,以包涵体形式获高效表达.超声破碎细菌细胞得包涵体,用8mol*L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,探讨复性条件并采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化复性蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度,Western blot、ELISA及竞争抑制ELISA测活性.结果:复性蛋白质经纯化,纯度达95%以上.当氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为5mmol*L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为0.5mmol*L-1,10℃复性48h以上时,复性率较高.纯化后的表达蛋白6B11scFv能与HRP-COC166-9卵巢癌单抗反应并与卵巢癌抗原共同竞争结合卵巢癌单抗COC166-9,抑制率达67%,Western blot显示其相对分子质量为2.8×104,证明纯化后的表达蛋白质,能模拟卵巢癌抗原与卵巢癌单抗特异结合.结论:以包涵体表达的6B11scFv,经溶解复性纯化后,纯度高,活性好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄华梁	中国科学院遗传学研究所	16	158	7.0	12.0
2	冯捷	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	15	71	5.0	7.0
3	钱和年	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	20	81	6.0	8.0
4	付天云	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	11	51	4.0	7.0
5	崔恒	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	8	34	3.0	5.0
6	叶雪	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	8	51	4.0	7.0
7	刘英	北京医科大学人民医院妇科肿瘤中心	1	12	1.0	1.0