迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因的构建、表达及鉴定

• 作者: 刘玉林 秦红 金晓航 黄威权
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 迟缓爱德华菌 抗独特型 单链抗体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 689-693
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 构建、表达及鉴定迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因.方法 采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E11)中克隆出V_H和V_L可变区基因, 再通过重叠延伸拼接PCR方法在V_H和V_L可变区基因之间引入连接肽(Gly_4ser)_3,体外构建单链抗体基因;将其克隆至表达载体pET-28a并在大肠杆菌中表达,表达产物纯化后,用SDS- PAGE、Western blot及ELASA进行鉴定.结果 迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、纯化和体外复性,获得了高纯度的单链抗体片段,重组蛋白的分子质量为27 ku.ELASA分析结果证实迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力.结论 成功构建了迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv,为进一步制备迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦红	第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室	9	19	3.0	3.0
2	金晓航	第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室	31	190	7.0	12.0
3	黄威权	第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室	88	748	15.0	20.0
4	刘玉林	第四军医大学基础部药品研究中心	22	127	5.0	10.0