冻存人脐带间充质干细胞的分离培养

• 作者: 刘亭 刘志华 姜翙 孙宁 李晓媚 翁锦生
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 冻存人脐带 组织块贴壁培养 细胞鉴定 无血清培养 间充质干细胞 细胞因子 流式细胞术 干细胞 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2018,（29）
• 所属期刊栏目: 脐带脐血干细胞
• 页码范围: 4637-4642
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6830字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0620

摘要

背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道.目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性.方法:采用组织块贴壁法从冻存脐带组织中分离培养脐带间充质干细胞,分别用有血清和无血清培养基培养,观察其形态特征,绘制其生长曲线;流式细胞仪检测第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)和第14代脐带间充质干细胞(含血清培养基培养)表面抗原表达;第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)分别用成脂、成骨、成软骨诱导培养液诱导其分化,qPCR鉴定分化标记基因表达;检测第7代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)及其培养上清中的细胞因子水平.结果与结论:①从冻存人脐带组织原代培养的脐带间充质干细胞,呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛,脐带间充质干细胞可用无血清培养基传代培养,但增殖速率还远低于有血清培养基;②流式细胞术分析结果显示为脐带间充质干细胞CD90、CD73、CD105呈强阳性表达,CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/CD19、HLA-DR呈阴性表达;③经成脂、成骨和成软骨诱导培养14-28 d后,脂肪细胞标记基因PPARγ、骨细胞标记基因 Osteonectin、软骨细胞标记基因 CollagenⅡ的表达量显著升高;④第 7 代脐带间充质干细胞及其培养上清可检测出粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素α2、趋化因子 IP-10、白细胞介素4、白细胞介素6等细胞因子;⑤结果提示可从冻存人脐带中培养扩增脐带间充质干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓媚		6	13	2.0	3.0
2	刘亭		1	1	1.0	1.0
3	姜翙		9	34	3.0	5.0
4	刘志华		2	4	1.0	2.0
5	孙宁		1	1	1.0	1.0
6	翁锦生		2	1	1.0	1.0