三元融合蛋白MBP-SERPINA<em>3</em>-IFN-κ的表达及抗单纯疱疹病毒/人乳头瘤病毒功能研究

• 作者: 冀旺盛 刘新奇 王斌
• 来源期刊: 中国病毒病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ 原核表达 亲和层析 人乳头瘤病毒 1型单纯疱疹病毒 促创口愈合
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 443-448
• 页数: 6页
• 分类号: R737
• 语种: 中文
• DOI: 10.16505/j.2095-0136.2019.0067

摘要

目的 原核表达三元融合蛋白MBP-SERPINA3-IFN-κ(简称MSIK),并在细胞和小鼠水平上对其抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的功能进行研究.方法 构建三元融合蛋白MSIK的原核表达质粒pET30-MBP-SERPINA3-IFN-κ,将构建好的质粒转入BL21 (DE3) codonPlus大肠埃希菌并利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactophyranoside,IPTG)诱导蛋白的表达,经亲和层析纯化得到蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证目的蛋白的纯度,用1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)分别在角质细胞中及BALB/c小鼠上验证该蛋白的抗病毒活性,通过实时荧光定量PCR (Q-PCR)检测样本中病毒的含量.结果 该融合蛋白经IPTG诱导表达并由亲和层析纯化后,获得相对分子质量约为100×103的纯化蛋白,经SDS-PAGE法检验,并使用Image J进行灰度分析,该融合蛋白纯度大于95％.在角质细胞中,该三元融合蛋白能够有效抑制HSV-1病毒的复制,在小鼠皮肤创伤模型中,该三元融合蛋白同样能够有效抑制HSV-1病毒的复制并能够促进创口的愈合.结论 成功表达了三元融合蛋白MSIK,并利用亲和层析柱进行了有效的纯化.获得的融合蛋白具有良好的生物学活性,能够有效抑制HSV-1病毒的复制并促进创口的愈合.该三元融合蛋白可用于研发有效的抗HPV护创敷料,用来治疗一些由HPV引发的相关疾病.