双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体

• 作者: 李海娟
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬热栖热菌 双交换性同源重组 基因无痕敲除
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 143-148
• 页数: 6页
• 分类号: Q812
• 字数: 3941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2019.02.006

摘要

为在噬热栖热菌(Thermus thermophilus)中开发无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体并转化T.thermophilus HB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型.结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体进行转化,获取表观 Δ0042突变体的概率为10-4,而使用闭合环状载体,该概率可达10-3;基因型及表现型分析显示,这些表观 Δ0042均为TTP0042无痕敲除型突变体.该敲除手段在染色体上的基因TTC0340_0341中得到验证,从300个单菌落中成功鉴定出了1个 Δ0340_0341突变株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李海娟	西安文理学院生物与环境工程学院	6	2	1.0	1.0