小干扰RNA抑制胸腺生成素基因的表达对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 李文静 翟波 董向阳
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 关键词: 肺肿瘤 TMPO基因 细胞增殖 细胞凋亡 Notch1/mTOR信号通路
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 742-747
• 页数: 6页
• 字数: 4663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760／cma.j.issn.0253?3766.2019.10.004

摘要

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)抑制胸腺生成素( TMPO)基因的表达对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用脂质体转染法将TMPO siRNA转染至人肺癌A549细胞,将转染siRNA control作为阴性对照组.转染后48 h,采用实时荧光定量聚合酶链式反应( RT?PCR)和Western blot检测转染后细胞中TMPO的表达水平,四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中PCNA、cleaved caspase?3、Notch1和mTOR的表达水平.结果 RT?PCR检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和转染组细胞中TMPO mRNA的表达水平分别为1.01±0.11、0.99±0.10和0.36± 0.04. Western blot检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和转染组细胞中TMPO蛋白的表达水平分别为0.27±0.02、0.29±0.03和0.08±0.10;转染组细胞中TMPO mRNA和蛋白的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05). MTT检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和转染组细胞在转染24 h时的吸光度( A)值分别为0.35±0.04、0.37±0.04和0.34±0.03,转染48 h时A值分别为0.47±0.06、0.46±0.08和0.37±0.04,转染72 h时A值分别为0.75±0.08、0.73±0.07和0.49±0.05,转染96 h时A值分别为1.09±0.07、1.06± 0.08和0.56±0.06;转染组细胞在转染48、72、96 h的A值均低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和转染组中G0／G1 期细胞比例分别为(62.55±2.03)%、(61.24±3.15)%和(47.35± 2.44)%,S期细胞比例分别为(17.12± 1.31)%、(17.70± 2.01)%和(20.81± 2.06)%,G2／M 期细胞比例分别为( 20.33 ± 1.43)%、(21.06 ± 1.52)%和(31.84± 2.76)%,转染组G0／G1 期细胞比例均低于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05),G2／M期细胞比例均高于空白对照组和阴性对照组(均P＜0.05).转染组细胞的凋亡率为(34.10±2.69)%,明显高于空白对照组[(2.96±0.03)%]和阴性对照组[(3.01±0.04)%,均P＜0.05]. Western blot检测结果显示,转染后A549 细胞中 PCNA、Notch1 和 mTOR 蛋白的表达下调,cleaved caspase?3蛋白的表达上调.结论 抑制TMPO基因的表达能够显著抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制Notch1／mTOR信号通路激活有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文静	郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院郑州儿童医院内分泌遗传代谢科	14	74	4.0	8.0
2	翟波	郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院郑州儿童医院胸心外科	4	0	0.0	0.0
3	董向阳	郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院郑州儿童医院胸心外科	1	0	0.0	0.0