miR-195-5p通过靶向调控VEGFA的表达对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力的影响

• 作者: 张巍 李芳 赵曼曼
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 侵袭 迁移 肿瘤生长 miR-195-5p
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 100-107
• 页数: 8页
• 分类号: R737.3
• 字数: 6239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2019.02.001

摘要

探究microRNA-195-5p ( miR-195-5p) 对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力及宫颈癌肿瘤移植模型小鼠存活的影响.方法 RT-PCR检测宫颈癌患者癌组织及癌旁组织、正常宫颈上皮细胞NC104和宫颈癌细胞株 HeLa、 CaSki、 C33A 和 SiHa 中 miR-195-5p 和血管内皮生长因子 A ( vascular endothelial growth factor A, VEGFA) 的mRNA水平. miR-195 mimic转染细胞, RT-PCR检测miR-19-5p和VEGFA的表达.荧光素酶报告实验验证miR-195-5p和VEGFA靶向关系. miR-195 mimic和 pcDNA VEGFA ( pc-VEG-FA) 分别或同时转染细胞, 免疫印迹检测VEGFA表达, MTT检测细胞增殖, 流式检测细胞凋亡, Tran-swell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力, 免疫印迹检测Ki67、 Bcl-2、 Bax、 VEGF受体1 ( VEGF re-ceptor 1, VEGFR1)、基质金属蛋白酶-2 ( metalloproteinase-2, MMP-2) 和MMP-9的表达.建立宫颈癌移植瘤裸鼠模型, 记录小鼠存活情况及肿瘤体积, Tunnel检测肿瘤组织细胞凋亡情况, 免疫组化检测Ki67 表达, 免疫印迹检测VEGFR1、 MMP-2和MMP-9的表达.结果 与癌旁组织比较, 癌组织miR-195-5p表达水平明显降低, VEGFA表达水平明显升高; 与NC104细胞比较, miR-195-5p在多类宫颈癌细胞中表达显著升高, VEGF RNA水平明显降低. miR-195 mimic能显著上调miR-195-5p表达水平, 抑制VEGFA RNA表达,并且能降低VEGFA野生质粒 ( wild type, wt) 荧光素酶活性. pc-VEGFA能显著促进VEGFA表达, miR-195 mimic能显著降低HeLa细胞生长速度和Ki67、 Bcl-2表达水平, 上调细胞凋亡率及Bax表达水平; pc-VEGFA能显著减弱miR-195 mimic对细胞增殖、 Ki67和Bcl-2表达的抑制作用和对细胞凋亡及Bax表达的诱导作用.同时, miR-195 mimic 能减少 HeLa 细胞侵袭数并降低细胞迁移率, 抑制 VEGFR1、 MMP-2 和MMP-9表达, pc-VEGFA能显著减弱miR-195 mimic对细胞侵袭和迁移的抑制作用; 此外, 与Control组比较, miR-195 mimic组模型小鼠存活率明显升高, 肿瘤生长明显被抑制, 肿瘤组织细胞细胞凋亡率明显升高, VEGFR1、 MMP-2和MMP-9表达水平明显降低; 与miR-195 mimic组比较, mimic+pc-VEGFA组小鼠存活率明显降低, 肿瘤生长速度明显升高, 肿瘤组织细胞细胞凋亡率显著降低, VEGFR1、 MMP-2和MMP-9表达水平显著升高.结论 miR-195-5p能通过靶向VEGFA抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭和转移及肿瘤生长,并能促进肿瘤移植模型小鼠存活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李芳	重庆医科大学第二附属医院妇产科	26	276	11.0	16.0
2	赵曼曼	沈阳市第四人民医院妇产科	24	152	4.0	12.0
3	张巍	沈阳市第四人民医院妇产科	10	38	3.0	6.0