miR-136-5p靶向MIEN1对宫颈癌细胞侵袭和迁移的调节及机制研究

• 作者: 吴金涛 姚慧欣 孙喆 李会影 王钧峰
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 宫颈癌 miR-136-5p 迁移侵袭增强因子1 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 362-368
• 页数: 7页
• 分类号: R737.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb202003009

摘要

目的 探究miR-136-5p通过靶向作用迁移侵袭增强因子(MIEN1),对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 收集宫颈癌石蜡包埋组织块及癌旁组织20例,RT-PCR检测MIEN1和miR-136-5p基因表达水平并分析MIEN1和miR-136-5p基因表达的相关性.荧光素酶报告基因实验检测miR-136-5p和MIEN1的相互作用.宫颈癌细胞SiHa分为SiHa、miR-136-5p mimic、pC-MIEN1和pC-MIEN1+miR-136-5p组,转染相应的miRNA或载体,划痕法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blotting检测MIEN1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Twist、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平.结果 与正常组织比较,宫颈癌组织中MIEN1基因表达明显升高(2.27±0.67,P<0.01),miR-136-5p表达明显降低(0.35±0.13,P<0.01),且MIEN1和miR-136-5p表达水平呈负相关(r=-0.771,P<0.01).在荧光素酶报告实验中,与MIEN1 WT+mimic NC组比较,MIEN1 WT+miR-136-5p mimic组荧光素酶活性明显降低(0.34±0.05,P<0.01).在细胞实验中,与SiHa组比较,miR-136-5p mimic组MIEN1(0.22±0.03)、N-cadherin(0.13±0.03)、Twist(0.19±0.03)、MMP-9(0.14±0.03)、NF-κB p65(0.28±0.04)蛋白表达水平及p-AKT/AKT比率(0.15±0.03)明显降低,E-cadherin(0.82±0.09)蛋白表达明显升高(P<0.01),并且细胞迁移[(23.0±5.1)％]和侵袭能力(42±5)明显降低(P<0.01);pC-MIEN1组MIEN1(1.06±0.09)、N-cadherin(0.59±0.07)、Twist(0.76±0.08)、MMP-9(0.72±0.08)、NF-κB p65(1.48±0.13)蛋白表达水平及p-AKT/AKT比率(0.56±0.06)明显升高,E-cadherin(0.17±0.03)蛋白表达明显降低(P<0.01),并且,细胞迁移[(81.5±9.0)％]和侵袭能力(228±19)明显升高(P<0.01);与pC-MIEN1组比较,pC-MIEN1+miR-136-5p组MIEN1(0.53±0.06)、N-cadherin(0.31±0.04)、Twist(0.36±0.05)、MMP-9(0.40±0.06)、NF-κB p65(0.89±0.11)蛋白表达水平及p-AKT/AKT比率(0.33±0.06)明显降低(P<0.01),E-cadherin(0.67±0.09)蛋白表达明显升高(P<0.01),并且细胞迁移[(52.0±7.5)％]和侵袭能力(97±11)明显降低(P<0.01).结论 miR-136-5p可通过靶向作用于MIEN1抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能与抑制AKT/NF-κB信号通路有关.