IRX5促进肝癌细胞的侵袭迁移及其与miR-136-5p靶向关系的验证

• 作者: 代龙光 刘歆蕾 张令 张競之 朱丽英 朱科静 朱金凤 李兴 沈婕 潘卫 许永劼 许雯 钱雯
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 肝肿瘤 细胞运动 肿瘤侵润 双荧光素酶 IRX5 miR-136-5p
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 358-363
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20192806

摘要

目的 探讨易洛魁族同源盒基因5(IRX5)对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,并验证其与miR-136-5p的靶向关系.方法 取对数生长期肝癌SMMC7721细胞,过表达IRX5实验设空载质粒(pcDNA3.1)组和过表达IRX5(pcDNA3.1-IRX5)组,敲低IRX5实验设阴性对照(sh-NC)组和敲低IRX5(sh-IRX5)组.采用Western blot验证IRX5过表达和敲低效率;采用划痕实验和Transwell实验检测IRX5对肝癌细胞迁移与侵袭的影响;采用miRanda、Targetscan生物信息学软件预测IRX5结合的miRNA和位点;构建野生型和突变型IRX53′UTR双荧光素酶报告基因质粒,采用酶切、基因测序方法鉴定重组质粒是否构建成功.取对数生长期293T细胞,设野生型质粒+阴性对照(IRX5-3′UTR-Wt+NC)组和野生型质粒+miR-136-5p(IRX5-3′UTR-Wt+miR-136-5p)组,突变型质粒+阴性对照(IRX5-3′UTR-Mut+NC)组和突变型质粒+miR-136-5p(IRX5-3′UTR-Mut+miR-136-5p)组,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果 过表达IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均高于空载质粒组,敲低IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均低于阴性对照组(均P<0.05).成功构建IRX5基因3′UTR野生型和突变型双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶实验结果显示,IRX5-3′UTR-Wt+miR-136-5p组双荧光素酶活性低于IRX5-3′UTR-Wt+NC组(P<0.01),IRX5-3′UTR-Mut+miR-136-5p组与IRX5-3′UTR-Mut+NC组差异无统计学意义.结论 IRX5可促进肝癌细胞的侵袭与迁移,IRX5是miR-136-5p的一个靶基因,miR-136-5p可能通过IRX5的3′UTR抑制肝癌细胞的侵袭与迁移.