姜黄素通过增强自噬抑制Aβ1-42诱导的BV2小胶质细胞和原代小胶质细胞炎症反应

• 作者: 余鸿强 尉杰忠
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 姜黄素 小胶质细胞 自噬 炎症
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 492-501
• 页数: 10页
• 分类号: R964
• 字数: 6196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2019.07.002

摘要

目的 研究姜黄素对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)刺激所致小鼠小胶质细胞BV2细胞和原代小胶质细胞炎症的作用及机制.方法 姜黄素0.1,1,5,10,15,25和40 μmol·L-1与BV2细胞培养24 h,MTT法和ATP法检测细胞存活.姜黄素5和10 μmol·L-1预处理BV2细胞和原代小胶质细胞2 h后,加入Aβ1-42 1 mg·L-1共同作用24 h,使用实时荧光定量PCR法检测BV2细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平,同时检测原代小胶质细胞TNF-α和iNOS mRNA表达水平;BV2细胞加姜黄素5和10 μmol·L-1培养2 h后,加Aβ1-42 1 mg·L-1培养24 h,Western印迹法检测BV2细胞中iNOS、自噬相关蛋白5(Atg-5)和P62蛋白表达水平及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)与LC3-Ⅰ的比值;姜黄素5和10 μmol·L-1预处理BV2细胞和原代小胶质细胞24 h后,加入Aβ1-42 1 mg·L-1共同作用4 h,Western印迹法检测BV2和原代小胶质细胞对Aβ1-42的吞噬;原代小胶质细胞加入姜黄素5和10 μmol·L-1,24 h后加Aβ1-42 1 mg·L-1培养4 h,细胞免疫荧光染色法检测原代小胶质细胞对Aβ1-42的吞噬和离子钙接头蛋白分子1(Iba1)蛋白表达水平.稳定敲降Atg-5的BV2细胞加姜黄素5和10 μmol·L-1培养2 h后,加Aβ1-42 1 mg·L-1培养24 h,Western印迹法检测稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平.结果 MTT和ATP结果显示,姜黄素≤25 μmol·L-1时对BV2细胞无明显细胞毒性.实时荧光定量PCR结果显示,与Aβ1-42相比,姜黄素5和10 μmol·L-1组细胞内iNOS,IL-6和TNF-α mRNA水平明显降低(P<0.01),原代小胶质细胞内iNOS和TNF-α mRNA水平明显降低(P<0.01);Western印迹结果显示,与Aβ1-42组相比,姜黄素10 μmol·L-1组细胞内iNOS和P62蛋白表达显著减少(P<0.01), LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值和Atg-5蛋白表达增加(P<0.01);与Aβ1-42组相比,姜黄素10 μmol·L-1组BV2细胞和原代小胶质细胞对Aβ1-42蛋白的吞噬明显增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,与Aβ1-42组相比,姜黄素5和10 μmol·L-1组平均每个细胞内Aβ1-42荧光强度明显增加(P<0.01),Iba1的荧光强度降低(P<0.01);与Aβ1-42相比,姜黄素10 μmol·L-1不影响稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平.结论 姜黄素通过增强Atg-5表达,促进小胶质细胞对Aβ1-42蛋白的吞噬,抑制Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎症反应.

作者信息

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1	余鸿强		1	0	0.0	0.0