水稻小热休克蛋白OsHSP20抗体特性鉴定及应用

• 作者: 何婧 刘寒 张恒木 李静 郭留明
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小热休克蛋白 多克隆抗体 蛋白质印迹法
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 235-240
• 页数: 6页
• 分类号: Q785|S511.01
• 字数: 4196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16819/j.1001-7216.2019.9009

摘要

[目的]在前期克隆了一个水稻小热休克蛋白(OsHSP20)的基础上,进一步分析该蛋白多克隆抗体的免疫反应特性和应用范围,为深入鉴定该类基因的功能奠定基础.[方法]利用合成多肽和其原核表达产物分别免疫家兔制备了相应的多克隆抗体;ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA用于分析比较多克隆抗体效价和灵敏度;Western blot用于鉴定多克隆抗体的特异性和应用范围.[结果]Western blot分析显示,利用重组OsHSP20蛋白及其合成多肽所制备的多克隆抗体均可以在原核表达OsSHSP样品中特异性检测到1条大小与预期一致(37 kD)的条带,表明两种方法获得的多克隆抗体都具有高度的特异性;ACP(Antigen-coated plate)-ELISA和dot-ELISA分析表明,利用重组蛋白制备的多克隆抗体效价和灵敏度均高于利用多肽制备的抗体.进一步的Western blot分析显示该抗体可用于多种植物小热休克蛋白(SHSP)的检测.[结论]制备了OsHSP20蛋白质抗体,且具有高度的特异性和较高的效价和灵敏度,可广泛地用于多种单、双子叶植物HSP20蛋白的表达分析,有助于OsHSP20及其他植物同源蛋白的功能鉴定.