多重PCR快速鉴定分枝杆菌方法的建立

• 作者: 万康林 刘志广 刘海灿 尹树鹏 李晓琴 李马超 楼永良 言晨绮 赵秀芹
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 多重聚合酶链反应 分枝杆菌 结核分枝杆菌 北京基因型
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 771-777
• 页数: 7页
• 字数: 5222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2019.10.008

摘要

目的 建立并评估一种快速鉴定分枝杆菌的多重PCR法,为结核病的快速病原诊断提供技术手段.方法 选取16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk_20680基因,设计特异性引物,经条件优化,建立多重PCR方法.对非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、卡介苗(BCG)菌株、7种常见的非结核分枝杆菌(NTM)、7种常见的呼吸道病原菌和甘肃省93株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株进行检测鉴定,评价其敏感性和特异性.结果 16S rRNA、Rv0577、RD9和mtbk_20680基因产物长度分别为543 bp、786 bp、369 bp和231 bp.MTB北京基因型的4个基因均为阳性,而非北京基因型mtbk_20680基因为阴性;非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌、BCG菌株均为16S rRNA和Rv0577阳性;7种NTM仅16S rRNA为阳性;7种呼吸道菌检测结果均为阴性.93株MTB临床分离株中鉴定为北京基因型菌株的有80株,占86.02％,非北京型菌株有13株,占13.98％.该方法的特异性为100％.结论 该多重PCR法可以准确鉴别分枝杆菌、结核分枝杆菌复合群(MTBC)、NTM、MTB、北京基因型与非北京基因型MTB,具有高度的敏感性和特异性.