昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养

• 作者: 刘延玲 李洋 王红军 董晓 董焕声 赵向远
• 来源期刊: 青岛农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 胚胎生殖细胞 饲养层 生长因子 传代方法 分化
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 动物遗传育种
• 页码范围: 85-90,102
• 页数: 7页
• 分类号: S813.1
• 字数: 5336字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1674-148X.2019.02.002

摘要

胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG)是来源于原始生殖细胞(primordial germ cells,PGC)的多潜能干细胞.本研究旨在优化昆明白小鼠EG细胞的培养条件.以昆明白小鼠10.5 dpc胚胎PGC为材料,以丝裂霉素C处理的小鼠成纤维细胞(mouse embryonic germ cells,MEF)为饲养层,培养小鼠EG细胞,以对影响小鼠EG细胞传代的因素进行探讨.用ELISA试剂盒定量检测MEF自身分泌生长因子SCF、bFGF、LIF的浓度;以培养液是否添加生长因子,观察PGC/EG的培养效果;比较了机械分割法、胰酶消化法和胶原酶Ⅳ消化法对EG传代培养的影响;对获得的EG进行多能性鉴定.结果 表明,培养3d的饲养层上清液中含75.7 ng/L SCF、125.7 ng/LbFGF、196.6 ng/L LIF,培养5d的饲养层上清液中含76.2 ng/L SCF、136.2 ng/L bFGF、214.2 ng/L LIF;培养液添加生长因子显著提高了EG的克隆数、传代数(P＜0.05);机械分割法与酶消化法对EG传代差异显著(P＜0.05),而两种酶法对EG传代无显著影响(P＞0.05);所分离的EG细胞显示AKP染色强阳性;EG体外培养时会自分化为神经样细胞、上皮样细胞;EG细胞呈Oct4、SSEA 1的免疫荧光检测阳性.结果 提示,饲养层自身能分泌少量生长因子,但培养液中添加生长因子可显著改善昆明白小鼠EG培养效果,酶消化法更适合于昆明白小鼠EG的传代培养.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董晓	青岛农业大学生命科学学院	16	53	5.0	6.0
2	赵向远	青岛农业大学动物科技学院	5	11	2.0	3.0
3	董焕声	青岛农业大学动物科技学院	13	14	2.0	3.0
4	王红军	青岛农业大学动物科技学院	6	11	2.0	3.0
5	李洋	青岛农业大学生命科学学院	2	4	1.0	2.0
6	刘延玲		1	0	0.0	0.0