番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定

• 作者: 吴海涛 吴萌 朱善元 王安平 顾玲玲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭细小病毒 病毒样颗粒 杆状病毒/昆虫细胞表达系统 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 468-474
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0055

摘要

为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定,得到重组Bacmid DNA.将其转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒rBac-VP3,利用SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验对重组蛋白的表达情况进行检测,负染电镜观察病毒样颗粒,并通过Western-blot对病毒样颗粒进行鉴定.SDS-PAGE和Western-blot结果表明重组蛋白大小正确.间接免疫荧光试验结果显示,重组蛋白获得了成功表达.利用负染电镜可观察到直径约20 nm的典型二十面体病毒样颗粒.Western-blot结果显示该病毒样颗粒由VP3蛋白组成.本研究首次成功利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统制备了番鸭细小病毒样颗粒,为番鸭细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱善元		39	49	3.0	5.0
2	吴萌		16	31	4.0	5.0
3	王安平		24	24	2.0	4.0
4	吴海涛		14	8	2.0	2.0
5	顾玲玲		4	0	0.0	0.0