用于水生病原菌的3种高通量活菌计数方法的比较

• 作者: 杨倩 董宣 谢国驷 邹培卓 黄捷
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 活菌计数 MTT比色法 ATP生物发光法 高通量生长曲线法
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 133-140
• 页数: 8页
• 分类号: S947.9
• 字数: 6002字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180421001

摘要

以一株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)作为研究对象,比较了MTT [3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法在活细菌高通量计数上的应用效果.用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定了上述3种方法在副溶血弧菌活菌计数的标准曲线和线性范围.结果 显示,副溶血弧菌的MTT比色法以DMSO溶解的MTT产物甲瓒在555 nm的吸光度(OD555nm)为计数依据,活菌数的对数(LgC)与LgOD555nm线性关系的标准曲线为LgC=(1.0439±0.0200)LgOD555 nm+(8.0565±0.0125),相关系数R2=0.9965,线性检测范围为7.8×106～2.5×108 CFU/ml;ATP生物发光法以ATP产生的相对发光度值(RLU)为计数依据,LgC与LgRUL线性关系的标准曲线为LgC=(0.9590±0.0065)LgRLU+(0.9949±0.0366),相关系数R2=0.9994,线性检测范围为1.0×104～3.0× 108 CFU/ml;高通量生长曲线法以生长曲线达到拐点的时间(Ts)为计数依据,LgC与Ts线性关系的标准曲线为LgC=-(0.8727±0.0230)Ts+(9.0128±0.1572),相关系数R2=0.9924,线性检测范围为1.0× 100～1.0× 107 CFU/ml.用3种方法对实际菌液测量并与平板计数法比较表明,ATP生物发光法与高通量生长曲线法有很好的准确性,MTT比色法准确度稍差,而高通量生长曲线法有最宽的线性范围,也最适合高通量测定.