重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测日本血吸虫感染性钉螺

• 作者: 刘燕红 应清界 张键锋 李伟 李婷 杨坤 熊春蓉 董萱 赵松
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 钉螺 重组酶介导的核酸等温扩增技术 荧光检测
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 109-114,120
• 页数: 7页
• 分类号: R383.24
• 字数: 5466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16250/j.32.1374.2019026

摘要

目的 建立重组酶介导的核酸等温扩增荧光(Recombinase aided amplification,RAA)法快速检测日本血吸虫感染性钉螺技术,并探索钉螺样品的最佳处理方式.方法 将钉螺样本分成3组,每组均含7个亚组,其中6个亚组分别为50只阴性钉螺中混合1、2、3、4、5、10只日本血吸虫感染性钉螺,1个亚组为100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺.3组钉螺分别采用压碎去壳核酸试剂盒提取法、压碎去壳核酸粗提法和直接压碎带壳核酸粗提法进行处理,并分别进行荧光RAA与PCR法检测,对检测结果进行比较.结果 建立了荧光RAA检测技术,工作温度为39℃,30 min内即可完成日本血吸虫感染性钉螺检测.钉螺群体样本采用压碎去壳核酸试剂盒提取法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺;采用压碎去壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检测到100只阴性钉螺中混合1只感染性钉螺,PCR法最低可检测到50只阴性钉螺中混合3只感染性钉螺;采用直接压碎带壳核酸粗提法处理后,荧光RAA法最低可检出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺,PCR法仅可检测出50只阴性钉螺中混合10只感染性钉螺.结论 成功建立了钉螺群体样本中日本血吸虫感染性钉螺快速检测的荧光RAA法,该方法具有快速、灵敏、操作简便等特点;压碎去壳核酸粗提法为钉螺样品的最优处理方式.