3β-HSD基因沉默细胞株的建立及其对DEHP致凋亡的影响

• 作者: 徐新云 曾怀才 王冰玉 王利 秦逍云 郑凯 龙鼎新
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 3β-羟类固醇脱氢酶 基因沉默 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 字数: 5309字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2019.01.003

摘要

目的 构建3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)基因shRNA慢病毒干扰载体,建立3β-HSD基因沉默细胞株,研究3β-HSD基因沉默对塑化剂邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)致凋亡的影响.方法 根据GenBank提供的3β-HSD基因mRNA序列,设计合成3条干扰序列,退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中,将重组慢病毒载体转染293FT细胞,收集病毒上清,感染MCF-7细胞.利用嘌呤霉素筛选得到3β-HSD沉默细胞株,通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)对干扰效果进行鉴定.用不同剂量DEHP对MCF-7细胞和3β-HSD沉默细胞染毒24 h,检测凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8的基因和蛋白表达水平的变化.结果 该实验插入慢病毒载体PLVX-shRNA2-puro中的3β-HSD基因干扰序列与设计的序列一致;3β-HSD沉默细胞中3β-HSD基因表达水平较对照组MCF-7细胞降低77％,3β-HSD蛋白表达水平较对照组MCF-7细胞降低74％.不同剂量DEHP染毒3β-HSD沉默细胞和MCF-7细胞后,qRT-PCR结果显示,MCF-7细胞中Bax基因表达水平较对照组(0 mmol/L DEHP)升高28％～54％,Caspase-3基因表达水平升高13％～49％,Caspase-8基因表达升高21％～70％.与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞中Bax基因表达水平降低11％～28％,Caspase-3基因表达降低12％～23％,Caspase-8基因表达降低11％～34％.Western blot结果显示,MCF-7细胞中BAX蛋白表达水平较对照组升高28％ ～61％,Caspase-3蛋白表达升高40％ ～48％,Caspase-8蛋白表达升高31％～84％.与同染毒剂量组的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞Bax蛋白表达水平降低11％～27％,Caspase-3蛋白表达降低21％～40％,Caspase-8蛋白表达降低12％～25％.结论 该研究成功构建了3β-HSD基因沉默细胞株.DEHP可引起细胞凋亡基因及蛋白表达升高,3β-HSD基因沉默能在一定程度上抑制DEHP对凋亡基因的活化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐新云	深圳市疾病预防控制中心毒理研究所	61	338	11.0	15.0
2	曾怀才	南华大学公共卫生学院	39	148	7.0	10.0
3	秦逍云	深圳市疾病预防控制中心毒理研究所	5	25	1.0	5.0