Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析

• 作者: 吴楚漫 吴越 周文怡 姜浩东 彭俊崴 朱平 朱烁基 赵明一 郭惠明 陈瑞平 黄焕雷
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: Hartley豚鼠 耳朵 成纤维细胞 生物学特性
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 245-251
• 页数: 7页
• 分类号: R-332
• 字数: 5118字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2019.03.006

摘要

本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法,为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞.首先采用0.05％ Trypsin-EDTA和Collagenase Ⅳ两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察,支原体检测,Vimentin蛋白免疫荧光鉴定,测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率,核型鉴定检测病毒对核型的影响.分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞,消化后2～3h即大部分贴壁并基本完全伸展,细胞呈梭形或多角形,胞浆饱满,立体感强,细胞核清晰形态良好,支原体检测阴性.细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin.生长曲线为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律,细胞倍增时间为24.85 h.逆转录病毒感染效率达75.6％,病毒感染后染色体2n=64的细胞占90％,遗传稳定核型正常.本研究提供的体细胞获取方法操作简单,效率高,获取的细胞状态良好,细胞增殖速度快,细胞感染率高,是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段,为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础.