牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究

• 作者: 于永生 张立春 曹阳 王晓阳 罗晓彤
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 牛耳皮肤成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和酶 基因转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 页码范围: 87-90,98
• 分类号: Q813.1|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1573.2011.04.017

摘要

为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因.采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9d获得稳定转染的细胞克隆.PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2～3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录.结果表明:细胞贴壁后9d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录.本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件.