牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染Ipr1基因

• 作者: 何小宁 兰杰 华松 宋永利 张涌 权富生 李吉霞 贺小英 郑月茂
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 供体细胞 真核表达载体 Ipr1基因 牛胎儿成纤维细胞 电穿孔 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 585-592
• 分类号: S823|Q952.5.4
• 字数: 5640字
• 语种: 中文

摘要

为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染.克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体.用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24 h后观察荧光表达,48 h后加入600μg·mL-1 G418,筛选1周,300 p.g·mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养.对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析.结果,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEGFP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1500 bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体.说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性.可以作为核移植进行转基因克隆牛研究.