牛皮肤成纤维细胞的分离培养及转染人溶菌酶基因

• 作者: 何小宁 何玉龙 刘利杰 张涌 彭树英 贾淑玲
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛皮肤成纤维细胞 溶菌酶 基因转染 脂质体 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 798-803
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 3989字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.05.013

摘要

为了为核移植法制作转人溶菌酶基因克隆牛提供供体细胞,研究体外分离培养牛皮肤成纤维细胞并进行了人溶菌酶基因转染.首先采用组织块贴壁法分离培养牛耳成纤维细胞,经传代纯化后,脂质法将含有双重筛选标记的人溶菌酶乳腺特异性表达载体转入体外培养的第4代牛皮肤成纤维细胞,500 μg/mLG418筛选2周,G418减半继续培养2～3代,然后对转染筛选后的细胞进行PCR检测及核型分析.结果表明,转染24 h后荧光显微镜下检测到有绿色荧光蛋白表达,传至15代的细胞核型正常,含有正常牛的二倍体核型(60,XX),PCR检测得到大约850bp的片段.说明目的基因已成功导人并表达.研究所获得的转基因牛耳成纤维细胞整合并表达了外源基因,同时保持了遗传稳定性,可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究.