摘要:
目的 探讨microRNA-29c在雷公藤内酯醇(TP)抗克唑替尼耐药肺癌细胞增殖的作用及机制研究.方法 将克唑替尼耐药H3122分为miRNA-29c inhibitor+TP组、阴性对照miRNA(miRNA-NC)+TP组、TP组和对照组.采用MTT检测细胞存活率,AnnexinV-FITC试剂盒检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3、DNMT3a表达,RT-qPCR检测DNA甲基转移酶3(DNMT3)mRNA、miRNA-29c表达,定量甲基化特异性PCR(QM-SP)法检测视黄酸受体(RARb)、RAS域家族蛋白1(RASSF1)、死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和p16 mRNA表达和甲基化状态.结果 与对照组比较,TP组中,TP浓度为10 nmol/L、25 nmol/L和50 nmol/L时,miRNA-29c表达增加(t分别=43.12、61.65、83.50,P均<0.05),DNMT3a表达下降(t分别=146.56、628.05、653.16,P均<0.05).与对照组比较,TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化降低(t分别=14.76、94.52、103.08、67.15、72.22,P均<0.05)、细胞凋亡率增加(t=-9.32,P<0.05),Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显降低,Bax、cleaved-ca-spase3表达明显增高.与miRNA-NC+TP组比较,miRNA-29c inhibitor+TP组细胞存活率、p16、RASSF1、DAPK1、RARb甲基化明显增加(t分别=-4.08、-7.77、-67.84、-59.66、-46.79,P均<0.05),细胞凋亡率明显下降(t=5.40,P<0.05).Western blot结果显示DNMT3a、Bcl-2表达明显增加,Bax、cleaved-caspase3表达明显降低.结论 TP能够增加miRNA-29c表达,下调DNMT3表达和活性,降低抑癌基因的甲基化水平,抑制H3122CR细胞增殖,发挥抗肺癌作用.